In One Room wird der Zuschauer zum Protagonisten. Erzählt werden drei kurze Geschichten, die sich in deinem eigenen Zimmer abspielen. Zu Beginn lernst du Yui Hanasaka kennen, die gerade neu hergezogen ist und sich ihrem neuen Nachbarn, nämlich dir selbst, vorstellt. In der zweiten Geschichte kommt Natsuki Momohara, deine kleine Schwester, zu Besuch und hilft dir im Haushalt, während es im letzten Teil des Animes um Moka Aoshima, eine Freundin aus Kindertagen und erfolglose Sängerin geht, die ein altes Versprechen erfüllen will.